Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
# Инокулируют подходящие количества среды №3 гомогенатом и /или его разбавлениями, содержащими, соответственно, 0,1 г, 0,01 г и 0,001 г (или 0,1 мл,
0,01 мл и 0,001 мл) испытуемого продукта. Инкубируют при температуре 30 - 350С в течение 24 - 48 ч. При наличии роста делают пересев на плотную среду №4 (агар Эндо) и инкубируют при той же температуре в течение 18-24 ч. В случае появления характерных для Enterobacteriaceae колоний грамотрицательных палочек определяют количество энтеробактерий в 1 г или в 1 мл образца по Таблице
2.6.13.-1.
Таблица 2.6.13.-1.
Результаты для каждого количества продукта Вероятное количество
0,1 г или 0,1 мл 0,01 г или 0,01 мл 0,001 г или 0,001 бактерий в грамме
мл продукта
+ + + Более 103
+ + - Менее 103, но более
102
+ - - Менее 102, но более
10
- - - Менее 10
При испытании трансдермальных пластырей 50 мл образца В пропускают через стерильный мембранный фильтр, как описано в разделе 2.6.12., помещают мембрану в 100 мл обогащенной питательной среды Е и инкубируют при температуре 35-37 0С 18-24 часа. После окончания инкубации делают пересев на по-
верхность агаризованной среды F для выявления энтеробактерий и других гра-мотрицательных микроорганизмов.
Escherichia coli
Испытуемый продукт готовят в соответствии с указаниями общего раздела
2.6.12. 10 мл образца или количество, представляющее 1 г или 1 мл продукта, помещают в 100 мл питательного бульона А, гомогенизируют и инкубируют при 35370С в течение 18-48 часов. Контейнер встряхивают, переносят 1 мл содержимого в 100 мл питательной среды G и инкубируют при 43-450С в течение 18-24 часов. Пересевают на чашки с агаризованной средой H и инкубируют при 35-370С в течение 18-72 часов. Рост красных, немукоидных колоний грамотрицательных палочек указывает на возможное присутствие E.coli. Для подтверждения проводят соответствующие биохимические тесты, например, по образованию индола. Продукт выдерживает испытание, если подобные колонии не обнаруживаются или подтверждающие биохимические реакции дают отрицательный результат.
# 10 мл образца в питательной среде №11 или количество, представляющее 1 г или 1 мл продукта, подготовленное и инкубированное как описано в разделе «Энтеробактерии и некоторые другие грамотрицательные бактерии. Количественная оценка», помещают в 100 мл питательной среды №3 и инкубируют при температуре 30-350С в течение 18-24 часов Пересевают на среду № 4 и инкубируют при температуре 30 - 35°С в течение 18-24 часов. На среде № 4 E.coli образуют, как правило, характерные малиновые колонии с металлическим блеском или без него, диаметром 2-4 мм. Подозрительные на принадлежность к E.coli колонии микроскопируют. При обнаружении грамотрицательных палочек отсевают на скошенную в пробирках плотную среду №1 и инкубируют при температуре 30 -35°С в течение 18-24 часов. Из каждой пробирки с чистой культурой делают пересевы на среды №14 (агар Симмонса) и №15 (бульон Хоттингера), а также используют для теста на цитохромоксидазу. Через 18-24 часа инкубации при 30 - 35°С отмечают бактериальный рост или его отсутствие на средах № 14 и № 15. Утилизацию цитрата устанавливают по изменению цвета среды №14 из зеленого в синий. Наличие индола определяют по появлению красного кольца на поверхности среды № 15 при добавлении реактива Ковача или Эрлиха.
Если в образце обнаружены грамотрицательные неспорообразующие палочки, не обладающие ферментом цитохромоксидазой, не утилизирующие цитрат натрия и образующие индол, считают, что лекарственное средство контаминиро-вано E. coli.
Salmonella
Испытуемый продукт готовят в соответствии с указаниями общего раздела
2.6.12, но с использованием питательного бульона А вместо буферизированного раствора хлорида натрия и пептона рН 7,0, гомогенизируют и инкубируют при 35370С в течение 18-24 часов. 1 мл обогащенной культуры переносят в 10 мл питательного бульона I и инкубируют при 41-430С в течение 18-24 часов. Пересевают не менее чем на две различные агаризованные среды, выбранные из агаризован-ных сред J, К и L. Инкубируют при 35-370С в течение 18-72 часов. На возможное присутствие сальмонелл указывает рост культур, имеющих следующие характерные признаки:
Агаризованная среда J: хорошо развитые бесцветные колонии.
Агаризованная среда К: хорошо развитые красные или красные с черным цен-
тром колонии.
Агаризованная среда L: маленькие прозрачные бесцветные или обладающие
окраской от розовой до белой колонии, часто окруженные зоной розового или красного цвета.
